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González Peña, Marco Antonio - Capítulo 4. Materiales y Métodos - Efecto de la Biodisponibilidad de Hierro en la Formación de Biopelículas Bacterianas -- Licenciatura en Bioquímica Clínica. - Departamento de Ciencias Químico Biológicas. - Escuela de Ciencias, - Universidad de las Américas Puebla.


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CAPÍTULO IV MATERIALES Y MÉTODOS I. Aislamiento y Caracterización de Bacterias Se buscó aislar y recolectar bacterias conocidas por su capacidad generadora de biopelículas tales como Staphylococcus sp., Streptococcus sp., Bacillus sp., Haemophylus sp., Pseudomonas sp., Actinomyces sp., Aeromonas sp., Klebsiella sp., Vibrio sp.
y E.
coli; a partir de muestras clínicas. Las muestras se sembraron en medios selectivos y no selectivos para el aislamiento e identificación de las bacterias, tales medios fueron Gelosa Sangre, Agar Sal y Manitol y Agar Mac Conkey incubados a 37°C durante 24 horas.
La identificación del género y especie bacteriana se realizó a través de las características morfológicas, la observación microscópica utilizando la tinción de Gram (cristal violeta 1 min, yodo-lugol 1 min, alcohol-cetona 10 seg y rojo de safranina 30 seg) y pruebas bioquímicas para Gram positivos y Gram negativos (TSI, LIA, MIO, Citrato de Simmons, Rojo de Metilo-Voges Proskauer, reducción de Nitratos y prueba de oxidasa).
Para su conservación las cepas aisladas fueron sembradas en Tripticasa Soya Agar (TSA) y refrigeradas a 4°C. II. Curva de Crecimiento Se realizó una curva de crecimiento bacteriano para determinar el tiempo de generación y el tiempo de incubación adecuado para cada microorganismo.
Se preparó una suspensión en solución salina correspondiente a 1x104 UFC-ml de cada bacteria, se tomaron 20 µl de dicho inóculo y se transfirieron a la microplaca que contenía 180 µl del caldo Infusión Cerebro- Corazón (BHI).
Se incubó a 37°C durante 24 horas y se realizaron lecturas de la absorbancia a 630 nm cada hora en el Lector de Absorbancias BioTek® ELx800. III. Formación de Biopelículas Para la evaluación de la capacidad de las bacterias para formar biopelículas se utilizó un método cuantitativo (superficie de polietileno) y un método semi-cuantitativo (superficie de vidrio).
En ambos casos se prepararon inóculos de cada bacte...






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