Alonso Sánchez, Alexandro Gerardo - Apéndice B. Soluciones - Caracterización electrofisiológica del transportador OSHTK1;1 del arroz (Oryza Sativa) Reportar como inadecuado




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Alonso Sánchez, Alexandro Gerardo - Apéndice B. Soluciones - Caracterización electrofisiológica del transportador OSHTK1;1 del arroz (Oryza Sativa) -- Licenciatura en Biología. - Departamento de Ciencias Químico Biológicas. - Escuela de Ciencias, - Universidad de las Américas Puebla.


Introducción



Se pueden desfolicular con pinzas y microscopio los que tengan el folículo flojo 7.
Cada mañana hay que cambiar el medio por ND-96 con Calcio y Gentamicina fresco para evitar el desarrollo de microorganismos (a pesar de la gentamicina) Formatted: Font color: Auto A.11.4.
Inyección de RNA en ovocitos 1.
Colocar el inyector en el manipulador con cuidado y ajustarlo para que no resbale 2.
hacer puntas de vidrio para inyectar (largas) a.
se coloca en el jalador y se aprieta, b.
se ajusta la temperatura indicada y se dejan caer c.
con el microscopio hay que ver hasta dónde está tapada y cortar todo lo que esté tapado 3.
se llena la punta con aceite de inmersión (con la aguja de insulina) 4.
se coloca en el inyector: a.
sacar la punta metálica del inyector · empty · b.
Colocar la punta de vidrio con cuidado y ajustarla c.
Sacar un poco la punta del inyector para asegurarnos que está saliendo · empty · 5.
En una caja petri se coloca parafilm y 1ul de RNA 6.
se ajusta en el inyector la cantidad de RNA que se va a inyectar (hay que ver el código en la parte de abajo y ponerlo) 7.
Cargar la punta con todo el RNA que se puso en el parafilm ·fill· 8.
colocar ovocitos en la caja con hoyos (que son para que no se estén moviendo al inyectarlos) 9.
picar al ovocito ligeramente (pero que pase la membrana) e inyectar ·inyect· 10.
Retirar y repetir hasta inyectar los ovocitos deseados 11.
Para inyectar otro RNA o H2O para los controles hay que cambiar la punta de vidrio por una nueva. 12.
Se dejan en la incubadora a 15-17ºC al menos 24 h antes de empezar a registrar Formatted: Font color: Auto B.
Soluciones B.1.
Solucion para Ovocitos ND96 Concentración Agregar para Stock 1M (50 ml) 96 mM 2.0 mM 1.0 mM 5.0 mM 2.5 mM 1.8 mM 12.92 g 3.72 g 10.165 g 5.95 NaCl KCl MgCl2 HEPES-Tris Piruvato CaCl2* Gentamicina** *Si es sin calcio no se agrega CaCl2 7.35 g **Se prepara una solución sin gentamicina pH=7.4 Ajustar la osmolaridad a 240-260 mOsm-Kg Para 1L Para 50...






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