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Miranda Vergara, María Cristina - Capítulo 7. Discusión - Análisis de las propiedades de transporte de una mutante del transportador AtCAX1 expresado en levadura -- Licenciatura en Biología. - Departamento de Química y Biología. - Escuela de Ciencias, - Universidad de las Américas Puebla.


Introducción



7.
DISCUSIÓN En este estudio se investigaron los efectos de una mutación en un residuo de histidina localizada en el dominio repetitivo C-2 dentro del intercambiador vacuolar catión-H+ de Arabidopsis thaliana AtCAX1 (Figura 7.1, secuencia en negrita, c-2).
Se ha propuesto que este dominio funciona como un filtro de selectividad para cationes (Kamiya & Maeshima, 2004).
Dentro de este dominio conservado hay un residuo de histidina en la posición 338 (His338; Figura 7.1, flecha roja).
Puesto que se ha establecido que los residuos de histidina determinan funciones relevantes en varias proteínas de membrana, como el transporte de protones (H+), como sensores del pH, reconocimiento del sustrato y la especificidad iónica (Wiebe et al., 2001), hipotetizamos que este residuo sería un buen candidato para realizar la mutación y estudiar sus efectos sobre las propiedades de transporte de AtCAX1.
Nuestra meta era cambiar la selectividad catiónica de CAX1 a favor de metales pesados, para que pudiera ser utilizado en el diseño de plantas útiles en fitorremediación. Figura 7.1.
Topología de OsCAX, según Kamiya y Maeshima (2004) En estudios iniciales, se observó que la cepa de levadura carente de sus transportadores naturales de calcio (vcx1 pmc1) transformada con la mutante H338N de 38 AtCAX1 mostró muy poco crecimiento en un medio que contenía calcio, lo cual sugiere que esta mutante es incapaz de transportar al Ca2+ hacia el interior de la vacuola.
Sin la habilidad de secuestrar calcio en exceso en la vacuola vía el intercambiador Ca2+-H+, la mutante se vuelve sensible al calcio en el medio de crecimiento.
El calcio en el citosol es fuertemente regulado para mantenerlo a niveles bajos, puesto que funciona como segundo mensajero en la mayoría de los procesos celulares.
Dentro de la célula vegetal la mayor cantidad de calcio se almacena en la vacuola y es liberado vía canales de calcio durante eventos de transducción de señales y respuestas a estrés (He...





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