en fr FORMATION, CRYSTALLOGENESIS AND 3D-STRUCTURE DETERMINATION OF A STABLE PHOSPHORYLATED FORM OF THE Ca-ATPASE. Formation, cristallogenèse et détermination de la structure tridimensionnelle, dun dérivé phosphorylé covalenReport as inadecuate




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1 Neuroendocrinologie et bilogie cellulaire digestives

Abstract : A stable phosphorylated specie of sarcoplasmic reticulum Ca-ATPase, is obtained frorn FITC­-labeled ATPase. We obtained tubular crystals of ibis stable phosphorylated form of Ca-ATPase from native SR vesicles. Alter three-dimensional reconstruction from electronic cryomicroscopy images, we generated the first three-dimensional structure at 8Â résolution of a phosphorylated form of a P­type ion transportinq ATPase. This new 3D structure shows conformation differences from others Ca-ATPase three-dimensional structures generated before, in particular cytoplasmic domains exhibit rearrangements. Trypsin and agarose-Red120 chromatography experiments confirm these observations. Relation between ATP driven pump and Ca-ATPase cytoplasmic movements during calcium transport, are discuss.

Résumé : Un dérivé phosphorylé covalent stable de la Ca-ATPase du réticulum sarcoplasmique est obtenu à partir de la protéine modifiée par le FITC. Nous avons produit de façon reproductible, des cristaux de type tubulaire de ce dérivé phosphorylé cuvaient stable, à partir de vésicules de réticulum sarcoplasmique natives. Après un traitement d-image de clichés de cryomicroscopie électronique, nous avons calculé la première structure tridimensionnelle d-un dérivé phosphorylé covalent stable d-une ATPase de type P à 8À de résolution. La comparaison de cette nouvelle structure avec les autres structures existantes de la Ca-ATPase, suggère certaines modifications notamment au niveau ou positionnement des domaines cytoplasmiques. Des expériences de trypsinisation et de chromatographie sur une colonne agarose-Red120, ont permis d affiner ces observations. Les liens entre ces moditications structurales et le mécanisme de transport de calcium couplé à l-hydrolyse d ATP sont discutés.

Mots-clés : protéine membranaire relation structure fonction Cristaux 2D cryomicroscopie électronique





Author: Franck Delavoie -

Source: https://hal.archives-ouvertes.fr/



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