La proteína pthb de xanthomonas axonopodis pv. manihotis es autoactiva en ensayos de doble hibrido Reportar como inadecuado




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La bacteriosis vascular de yuca producida por la bacteria Xanthomonas axonopodis pv. manihotis Xam es uno de los factores limitantes para la producción de yuca. Dentro de los primeros factores de patogenicidad identificados en esta bacteria se encuentra el gen pthB. La proteína PthB pertenece a la familia de efectores PthA-AvrBs3, que se caracterizan por presentar dominios NLS Nuclear Localization Signal y un dominio AAD Acidic Activation Domain, lo cual sugiere que estas proteínas actúan como factores de transcripción. La identificación de las proteínas de yuca que interactúan con PthB permitiría dar luces sobre la función de esta proteína en la patogenicidad de esta bacteria. En este trabajo se clonó pthB en una fusión traduccional con el BD Binding Domain del factor de transcripción GAL4. Después de transformar este constructo en una cepa de levadura, se observó autoactivación de los genes reporteros, incluso a concentraciones altas de 3-AT. La eliminación del primer, segundo o de los dos NLS y del AAD no eliminaron la capacidad de autoactivación de los genes reporteros mediada por PthB. Estos resultados indican la imposibilidad de su utilización en un tamizaje de una librería de ADNc de yuca para identificar las proteínas que interactúan con PthB.

Tipo de documento: Artículo - Article

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Palabras clave: Ciencias biologicas, Fitopatologia, Biologia Molecular, Yuca, bacteriosis vascular, doble hibrido, PthB





Fuente: http://www.bdigital.unal.edu.co


Introducción



Acta biol.
Colomb., Vol.
16 N.º 1, 2011 109 - 120 LA PROTEÍNA PTHB DE Xanthomonas axonopodis pv.
Manihotis ES AUTOACTIVA EN ENSAYOS DE DOBLE HÍBRIDO The PthB Protein from Xanthomonas axonopodis pv.
Manihotis is an Autoactive in Yeast Two-Hybrid Assays JULIANA GIL1, Bióloga; LAURA BOHÓRQUEZ2, Bióloga; LUISA B.
CASTIBLANCO3, M.Sc.; ADRIANA BERNAL3, M.Sc.; CAMILO LÓPEZ4, Ph.
D. 1 Universidad de California-Davis, California, Estados Unidos. 2 Corpogen, Bogotá, Colombia. 3 Departamento de Biología, Universidad de los Andes, Bogotá, Colombia. 4 Departamento de Biología (edificio 421), Universidad Nacional de Colombia, Bogotá, Colombia.
celopezc@unal.edu.co Presentado 2 de febrero de 2010, aceptado 16 de febrero de 2011, correcciones 17 de febrero de 2011. RESUMEN La bacteriosis vascular de yuca producida por la bacteria Xanthomonas axonopodis pv. manihotis (Xam) es una enfermedad limitante para la producción de yuca.
Dentro de los primeros factores de patogenicidad identificados en esta bacteria se encuentra el gen PthB.
La proteína PthB pertenece a la familia de efectores PthA-AvrBs3, que se caracterizan por presentar dominios NLS (Nuclear Localization Signal) y un dominio AAD (Acidic Activation Domain), lo cual sugiere que estas proteínas actúan como factores de transcripción.
La identificación de las proteínas de yuca que interactúan con PthB permitiría dar luces sobre la función de esta proteína en la patogenicidad de esta bacteria.
En este trabajo se clonó PthB en una fusión traduccional con el BD (Binding Domain) del factor de transcripción GAL4.
Después de transformar este constructo en una cepa de levadura, se observó autoactivación de los genes reporteros, incluso a concentraciones altas de 3-AT.
La eliminación del primer, segundo o de los dos NLS y del AAD no eliminaron la capacidad de autoactivación de los genes reporteros mediada por PthB.
Estos resultados indican la imposibilidad de su utilización en un tamizaje de una librer...






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