Implementación de un método fluorométrico para evaluación de actividad anti transcriptasa reversa del virus vih-1 Reportar como inadecuado




Implementación de un método fluorométrico para evaluación de actividad anti transcriptasa reversa del virus vih-1 - Descarga este documento en PDF. Documentación en PDF para descargar gratis. Disponible también para leer online.



Se implementó una prueba de tamizaje preliminar para evaluar la potencial inhibición ejercida por productos de origen natural y sintético sobre la actividad de la proteína Transcriptasa Reversa del virus VIH-1, en respuesta a la necesidad de disponer de un ensayo in vitro no radioactivo, relativamente rápido, que arroje resultados válidos, con costos moderados, bioseguro y de fácil acceso. Esta prueba se basa en la capacidad que tiene la proteína transcriptasa reversa viral para formar DNA de cadena sencilla cDNA a partir de RNA, utilizando deoxinucleótidos trifosfatados dNTPs, proceso conocido como transcripción reversa. Para detectar la actividad de la proteína se realizaron ensayos fluorométricos in vitro, usando proteína recombinante sin purificar, y nucleótidos fluorescentemente marcados Cy3-dCTP como parte del sustrato. Las condiciones establecidas para la actividad de la proteína fueron 5µg-reacción de RNA total y 2µg-reacción de oligo-dT12-18, reflejadas en 43.6% de incorporación del nucleótido fluoromarcado, A preliminary screening test to asses the potential of natural and synthetic products to inhibit the HIV-1 reverse transcriptase activity was implemented. This method is a response to the need of an in vitro, non radioactive, easy, biosafety and rapid test, with reliable results and accesible to our laboratories. This test is based on the ability of the viral reverse trascriptase RT of synthesize single strand DNA cDNA from a RNA strand, using triphosphate deoxynucleotides dNTPs, process known as reverse transcription. In order to detect the enzyme activity in vitro fluorometric assays were carried out, with unpurified recombinant protein and fluorescently marked nucleotides as part of the substrate Cy3-dCTP. Conditions for the protein activity were established at 5µg-reaction of total RNA and 2µg-reaction of oligo-dT12-18, which gave a 43.6% of incorporation of fluorescent nucleotide Cy3-dCTP.

Tipo de documento: Artículo - Article

Información adicional: Departamento de Farmacia-Facultad de Ciencias Universidad Nacional de Colombia Se autoriza la fotocopia de articulos y textos para fines de uso académico o interno de las instituciones citando la fuente. Las ideas emitidas por los autores son reponsabilidad expresa de estos y no de la revista.

Palabras clave: HIV-1 - Reverse Transcriptase - AIDS - cDNA - Retrotranscription, Cy3., VIH-1 - Transcriptasa reversa - SIDA - cDNA - Retrotranscripción, Cy3





Fuente: http://www.bdigital.unal.edu.co







Documentos relacionados