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1 GIN - Grenoble Institut des Neurosciences 2 INSERM U836, équipe 12, Neuropathologies et dysfonctions synaptiques

Abstract : Alzheimer-s disease AD is a neurodegenerative disorder characterized by a progressive loss of cognitive functions. This loss of cognitive functions is directly related to neuronal impairment, and more specifically, synaptic dysfunction. Two histopathological features found in AD patients- brains are related to protein deregulation: extracellular neuritic plaques composed of fibrillar β-amyloid peptide Aβ and intracellular aggregates composed of hyper-phosphorylated tau, named neurofibrillary tangles. Aggregated forms of these peptides have been considered neurotoxic, however, it is now recognized that soluble forms of these deregulated proteins are causal to the pathology. Soluble, oligomeric forms of Aβ peptide Aβo target excitatory synapses where they diminish synaptic function and cause loss of dendritic spines. Recently, it has been shown that the Aβo synaptotoxicity is tau-dependent. Another tauopathy, fronto-temporal dementia with Parkinsonism linked to chromosome 17 FTDP-17, exhibits synaptotoxicity, which has proved to be dependent on the phosphorylation state of tau. Thus, emerged the concept of synaptic tau in a pathological context. Recent studies have shown that a small quantity of tau is present in synapses under physiological conditions. These new data suggest that tau is a synaptic protein, in addition to being axonal, nuclear and membrane-associated. In this context, the work presented in this thesis characterizes the involvement of tau in synaptic function and its Aβo-induced disturbances. This work was conducted using primary cortical neurons cultured from mice and hippocampus slices and employed biochemical methods and confocal live-cell imaging. To study the impact of a synaptic activation on synaptic tau, we combined bicuculline, an antagonist of GABAa receptors and 4-amino-pyridine, potassium channel blocker, to establish long-term synaptic potentiation. By isolating the post-synaptic compartment i.e. the fraction containing the post synaptic density and its marker PSD-95, we have shown that synaptic activation induced an enrichment of tau in PSD. This suggests its involvement in synaptic plasticity. The study of the actin cytoskeleton, which is specifically enriched in dendritic spines, revealed that filamentous actin is a molecular partner of tau, which may provide a means of recruiting tau to the synapse. Turning our attention to a pathological context, exposure to Aβo induced tau recruitment to the synapse and disrupts the actin cytoskeleton organization without exogenous synaptic stimulation. This structural modification of the actin cytoskeleton could underlie the disturbance of plasticity and synaptic maintenance induced by Aβo. In conclusion, this thesis provides evidence that tau performs a physiological synaptic function that involves an interaction with the actin cytoskeleton. Further, the synaptic function of tau is altered in pathological conditions i.e. exposure to Aβo, and may contribute to the cognitive disturbances in AD.

Résumé : La maladie d-Alzheimer est une pathologie neurodégénérative caractérisée par une perte progressive des fonctions cognitives. Cette perte des fonctions cognitives est directement liée à une atteinte neuronale et plus particulièrement synaptique. Deux caractéristiques histopathologiques en lien avec des dérégulations protéiques sont retrouvées chez les patients atteints de la MA : les plaques séniles extracellulaires composées de peptides β-amyloïdes Aβ fibrillaires et la dégénérescence neurofibrillaire constituée d-agrégats intracellulaires de protéines tau hyper et anormalement phosphorylées. Les formes agrégées de ces protéines ont longtemps été considérées comme neurotoxiques, cependant, il est maintenant avéré que les formes solubles de ces protéines dérégulées étaient à l-origine de la pathologie. Les synapses excitatrices situées au niveau des épines dendritiques sont les cibles du peptide Aβ sous forme soluble et oligomèrique Aβo. Ce dernier en altère la fonction et induit leurs pertes. Récemment, il a été montré que cette action synaptotoxique de l-Aβo est dépendante de la protéine tau. De plus, dans un autre modèle de tauopathie, la démence fronto-temporale avec syndrome parkinsonien liée au chromosome 17 FTDP-17, la synaptotoxicité de tau s-est révélée dépendante de son état de phosphorylation. Ainsi, il émerge le concept de tau synaptique dans un contexte pathologique. Cependant, des études plus récentes ont montré que, en condition physiologique, une petite portion de tau se retrouve au niveau de la synapse. Au regard de ces nouvelles données, il est possible que tau, en plus d-être une protéine axonale, nucléaire et membranaire, soit aussi synaptique. Dans ce contexte, les travaux présentés dans cette thèse visent à étudier l-implication de la protéine tau dans la fonction synaptique et les perturbations induites par la présence d-Aβo. Ces travaux ont été effectués sur un modèle cellulaire de cultures primaires de neurones corticaux et sur tranche d-hippocampe de souris par des méthodes biochimiques et d-analyse dynamique en microscopie confocale sur cellules vivantes. Afin d-étudier l-impact d-une activation synaptique sur un système de culture neuronal, l-utilisation combinée de la bicuculline, antagoniste des récepteurs gabaergique GABAa et de 4-amino pyridine, bloqueur de canaux potassique, permet d-établir une potentialisation à long terme sur les synapses. Grâce à un protocole d-extraction permettant d-isoler le compartiment post-synaptique fraction contenant la densité post synaptique dont le marqueur protéique PSD-95, nous avons montré que l-activation synaptique enrichit la fraction PSD en protéine tau suggérant son implication dans les phénomènes de plasticité synaptique. L-étude du cytosquelette d-actine prépondérant au niveau synaptique a révélé que l-actine filamenteuse est un partenaire de tau. Dans un contexte pathologique, l-incubation d-Aβo induit le recrutement de tau à la synapse et perturbe l-organisation du cytosquelette d-actine. Ce changement structurel du cytosquelette d-actine pourrait être à l-origine des perturbations de la plasticité et du maintien synaptique induit par Aβo. En conclusion, l-ensemble des résultats de cette thèse suggère que tau exerce une fonction physiologique au sein de la synapse impliquant une interaction avec le cytosquelette d-actine et qu-en conditions pathologiques induites par Aβo, on observe une altération fonctionnelle du rôle de tau à la synapse qui pourrait participer aux perturbations cognitives caractéristiques de la MA.

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Keywords : Béta-amyloïde Actine Cytosquelette

Mots-clés : Cytoskeleton Alzheimer Synapse Amyloid beta Actin Tau





Autor: Marie-Lise Frandemiche -

Fuente: https://hal.archives-ouvertes.fr/



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