Evaluación de la distribución mitocondrial en ovocitos de perra: inmaduros, madurados in vitro y madurados in vivoReport as inadecuate




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Profesor guía

Reyes Solovera, Mónica de los; - Resumen

En caninos, el desarrollo de las biotecnologías reproductivas ha sido inferior encomparación al realizado en otras especies, básicamente debido a la baja eficiencia en lamaduración in vitro de los ovocitos. La adecuada maduración comprende tanto al núcleocomo al citoplasma, a nivel citoplasmático involucra la redistribución y desarrollo deorganelos, entre estos, la organización y la actividad metabólica de las mitocondrias. Sinembargo, no hay mayores antecedentes respecto al desarrollo citoplasmático in vitro enlos caninos, por lo que en la presente memoria se estudió la actividad y distribuciónmitocondrial en ovocitos de perras en estado inmaduro, madurados in vitro por 72 y 96h ymadurados in vivo.Se analizó un total de 766 ovocitos obtenidos de perras sanas sometidas aovariohisterectomía. Del total de estos ovocitos estudiados, 215 fueron utilizados comoinmaduros, 254 fueron madurados durante 72 horas y los otros 297 durante 96 horas.Adicionalmente se analizó una cantidad total de 15 ovocitos madurados in vivo, obtenidospor lavados del oviducto a perras en estro, ovariohisterectomizadas 72 h después de laovulación, la que se determinó mediante análisis de progesterona sérica. Tanto losovocitos inmaduros, madurados in vitro y madurados in vivo fueron procesados de formaseparada para evaluar la distribución y actividad mitocondrial, usando la sonda defluorescencia MitoTracker Red CMXRos®. Las observaciones se realizaron en unmicroscopio invertido con epifluorescencia.La actividad mitocondrial se evaluó de acuerdo a la fluorescencia emitida en alta, media ybaja para cada uno de los estados de maduración de los ovocitos y se analizó mediantechi-cuadrado. Se estableció dependencia entre las frecuencias de ovocitos con distintasintensidades de fluorescencia alta, media, baja al comparar las muestras provenientesde ovocitos inmaduros, madurados in vitro por 72 y 96 h, y madurados in vivo chicuadrado = 30,59; p< 0,01, indicando que la actividad mitocondrial se encuentradirectamente asociada al estado de maduración del ovocito de perra.En la actividad mitocondrial todos los ovocitos madurados in vivo presentaronfluorescencia de tipo media, la que predominó en ovocitos de perra inmaduros ymadurados in vitro; sin embargo, se observó un aumento en el porcentaje de ovocitos con3esta emisión de fluorescencia durante la maduración in vitro que indicaría una actividadmitocondrial progresiva durante el cultivo, asociada al tiempo de maduración.La distribución mitocondrial se evaluó mediante análisis descriptivo, determinándosecuatro patrones: Homogéneo liso completo A, Homogéneo granuloso completo B,Heterogéneo granuloso periférico y central C, y Heterogéneo granuloso central D. Enovocitos inmaduros se encontraron dos patrones de distribución mitocondrial A 72,1% yB 27,9%; en aquellos madurados in vitro por 72 h se presentaron los cuatro patrones,predominando el B 63,8%, seguido por C 20,5%, el A 9,8% y finalmente el D 5,9%.en los ovocitos madurados por 96 h se observaron los patrones, B 63,6%, seguido por C35,7% y finalmente D 0,7%. En el caso de los ovocitos madurados in vivo se describiósólo un patrón de distribución mitocondrial que correspondió a B.Con estos antecedentes se indica que en ovocitos inmaduros de perra predomina unadistribución uniforme de las mitocondrias en su citoplasma. Además la presentación detres patrones diferentes en los ovocitos madurados in vitro a aquel descrito en ovocitosmadurados in vivo podría indicar que durante la maduración in vitro se producenmovimientos de las mitocondrias en el citoplasma ovular. También, las distribuciones delas mitocondrias, variaron a través de la maduración in vitro, asemejándose a aquellosmadurados in vivo, sin embargo, hubo diferencias entre ambos tipos de maduración loque podría estar asociado a las condiciones de cultivo.Nota general

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario



Author: Saffie Vásquez, Pamela Cristina; -

Source: http://repositorio.uchile.cl/



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