Posible uso de la subunidad regulatoria de la proteína quinasa CK2 en mediar la exportación de proteínas hacia el exterior de las célulasReportar como inadecuado




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Profesor guía

Allende Rivera, Jorge; - Resumen

La proteína quinasa CK2 es una quinasa ubicua que fosforila serinas y treoninas deun gran grupo número de proteínas celulares. La holoenzima CK2 existe como untetrámero CK2a2b2 donde CK2a es la subunidad catalítica con actividad proteína quinasay CK2b es la subunidad regulatoria que modula la actividad y confiere estabilidad a CK2a.CK2 es una enzima muy conservada en diferentes especies, es esencial para la viabilidadcelular y está presente en distintos compartimientos y organelos celulares. Además, CK2 hasido encontrada unida a la cara externa de la membrana plasmática, actuando comoectoquinasa, catalizando la fosforilación de distintas proteínas extracelulares y regulandodistintos procesos como migración, adhesión y proliferación celular. Estudios previosutilizando la transfección de células HEK293T en cultivo, han demostrado que es necesariala expresión de ambas subunidades a y b para la aparición de actividad ectoquinasa en lasuperficie celular. La ectoquinasa se libera de la membrana en la presencia de sustratosespecíficos.El presente trabajo exploró la posibilidad de que la subunidad regulatoria CK2bpudiera exportar al medio extracelular otra proteína unida covalentemente a su cadenapolipeptídica. El modelo experimental consistía en la cotransfección de células HEK293Ten cultivo celular, con DNAs que codifican para las proteínas de fusión a CK2b y la CK2a.Se utilizó dos tipos de de proteínas de fusión: la glutathion S-transferasa unida a CK2bGST-CK2b y la proteína fluorescente verde también unida a CK2b GFP-CK2b, enambos casos la unión fue al extremo amino-terminal de CK2b. Se observó que estasproteínas de fusión se expresan, junto con CK2a, a niveles de actividad catalíticaparecidos, pero siempre menores a los observados con la expresión de CK2b nomodificada. Los resultados mostraron consistentemente a la proteína de fusión en loslisados celulares, pero no fue posible de detectarlas en el medio extracelular. Para estosanálisis se utilizaron técnicas muy sensibles como inmunoprecipitación específica, ensayosde actividad catalítica e inmunoblot western blot. Se concluye que la fusión de CK2b conotra proteína no altera per se el proceso de expresión de la proteína ectópica, pero si inhibesu traspaso por la membrana plasmática hacia el medio extracelular, posiblemente debido a la orientación estérica de las moléculas recombinantes usadasNota general

Memoria para optar al Titulo Profesional de Médico Veterinario



Autor: Contreras Gallardo, Carlos Antonio; -

Fuente: http://repositorio.uchile.cl/



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